فصل اول بررسي متون بيان مساله اخیرا اثر گروهی از مواد طبیعی بدست امروزه یکی از عوامل مهم شکست درمان عفونتها در آمده از گیاهانی که در کشور رشد میکنند در افزایش انسانها مقاومت میکروبی به آنتی بیوتیکها میباشد اثر ضدمیکروبی آنتی بیوتیکهای موجود زمانی که که جزو یکی از بزرگترین مشکالت سیستم سالمت در ترکیب با هم در معرض میکروب قرار میگیرند محسوب میشود. همچنین استفاده از مواد طبیعی و گزارش شده است. کورکومین که به Indian solid سنتتیک برای استفاده در درمان ترکیبی با آنتیبیوتیکها gold معروف است ترکیبی پلیفنولیک میباشد که از برای کاهش مقاومت میکروبی بر علیه آنها بسیار مورد زردچوبه) (Curcuma longa بدست میآید. این ترکیب توجه است زیرا با استفاده از همین آنتی بیوتیکهای به عنوان ادویه نگهدارنده و رنگ دهنده در غذاها مورد موجود موفقیتهای درمانی بر علیه عفونتها حاصل استفاده است. اثرات فارماکولوژیک متعددی برای این میشود و نیاز به تولید و عرضه آنتی بیوتیکهای جدید ماده گزارش شده که گروهی از آنها به شرح مقابل کمتر حس میشود. در نتیجه ضرورت یافت مواد جدیدی است : ضدزخم معده ضد اسپاسم روده دارای اثر که به راحتی از گیاهان بدست آمده یا به طور سنتتیک کاهش کلسترول ضدالتهاب آنتیاکسیدان ضد تولید میشود برای افزایش اثر درمانی آنتی بیوتیکهای سرطان ضد دیابت و غیره. همچنین اثرات ضدمیکروبی موجود باید مورد توجه قرار گیرد. این ماده و مشتقات آن در سالهای اخیر گزارش شده 7 سال پنجم - شماره -۱5 تابستان 138۹ [طرح دهندگان] کامیار مالزاده مقدم Kamyar.mollazadeh@gmail.com دکتر احمدرضا شاهوردی
که به چند نمونه میپردازیم. در مطالعهای اثر روغن پاتوژن مختلف گرم مثبت و گرم منفی به صورت زردچوبه و کورکومین خالص شده از آن بر علیه 15 in vitro سنجیده شد و نتایج با آنتیبیوتیکهای سویه از درماتوفیتها 4 سویه از کپکهای پاتوژن و 6 آمپیسیلین جنتامایسین اریترومایسین داکسیسیلین سویه از مخمرها در خوکچه هندی بررسی گردیده که مقایسه شد. در مطالعهاي ديگر اثر ضدميكروبي در این مطالعه کورکومین بر این سویهها اثری نداشته کورکومین و Bisdimethyl-Curcumin بر اما روغن زردچوبه در مقابل درماتوفیتها و کپکها از Actinobacillus actinomycetemcomitans و s n A خود خاصیت ضدمیکروبی نشان داده است. در مطالعهای methicillin-resistant Staphylococcus سنجيده شد دیگر اثر in vitro روغن زردچوبه بر علیه باکتریهای كه هر دو اثر خوبي از خود نشان دادند. در مطالعهاي باسیلوس سرئوس استافیلوکوک اورئوس باسیلوس ديگر اثر ضدميكروبي کورکومین و کورکومین ساب تیلیس اشرشیاکالی سودومونا آئرژینوزا و β-diglucoside بر سالمونال تیفی موریوم باسیلوس کواگوالنز سنجیده شد و مشخص شد که استافیلوکوک اورئوس واشرشیا کالی سنجيده شد كه وجود موادی مانند turmerone ar-turmerone و هر دو اثر بسيار خوبي از خود نشان دادند. با وجود curlone که ترکیباتی اکسیژنه هستند مسئول این اثر تمام این مطالعات و مطالعات ديگر موجود بررسی بر میباشند. در مطالعهاي ديگر که به آن میپردازیم اثر روی اثرات سينرژيستي این ماده با آنتیبیوتیکها تا به عصاره ریزومهای Curcuma longa بر باکتریهای حال صورت نگرفته است. سال پنجم - شماره -۱5 تابستان 138۹ ب 8
فصل دوم مواد و روشها ابتدا کورکومین از شرکت سیگما خریداری شد که دارای خلوص 65 تا 70 د درصدی است. سپس با روش کروماتوگرافی ستون سلیکا با حالل دی کلرو متان خالص شده و پس از آن با متانول و آب کریستاله شد که از روی کریستالهای سوزنی نارنجی رنگ و خصوصیات فیزیکی وشیمیایی دیگر میتوان به کورکومین بودن آن پی برد. سپس با تست کروماتوگرافی الیه نازک خلوص کورکومین و عاری بودن آن از ناخالصیهایش که عمدتا شامل dimetoxy کورکومین وbisdimetoxy کورکومین است را ثابت کردیم و از این ماده خالص بدست آمده برای تست فعالیت بیولوژیک بهره بردیم. این تست به روشassay Disc diffusion در مقابل 14 آنتیبیوتیک مختلف در محیط مولر- هینتون آگار انجام شد. برای انجام این تست دیسک های آماده 14 آنتی بیوتیک به شرح زیر خریداری شد. Penicillin G از گروه پنیسلینها Carbenicillin از گروه پنیسلینهای حساس به پني سليناز با طيف گسترده Ticaracillin از گروه پنیسلینهای حساس به پني سليناز با طيف گسترده Methicillin از گروه پنیسلینهای مقاوم به پنیسلیناز با طيف محدود Cephalexin از گروه سفالوسپورینهای نسل اول Cefepime از گروه سفالوسپورینهای نسل چهارم Vancomycin از گروه مهار کنندههای دیواره از گروه گلیکوپپتیدها Bacitracinا از گروه مهار کننده دیواره متفرقه Co- از گروه فلوئورکینولونها Ciprofloxacin Tetracycline از گروه سولفونامیدها trimoxazoleا از گروه تتراسیکلینها Erythromycin از گروه ماکرولیدها Clindamycin از گروه لینکومایسینها Nitrofurantoin از گروه داروی متفرقه ضد میکروبی. برای مشخص کردن فعالیت ترکیبی غلظت 500 ميكروگرم )inhibitory-sub( محاسبه شده سال پنجم- شماره ۱5 -تابستان 138۹ 9
سال پنجم- شماره ۱5 -تابستان 138۹ توسط تست استاندارد (MIC( از کورکومین به این دیسکهای استاندارد تلقیح گردید. میکروب پاتوژن Staphylococcus aureus گونه مورد آزمایش بود. سپس از این سوسپانسیون روی plate ها کشت داده شد و دیسکهای آنتی بیوتیک حاوی کورکومین روی plateک کار گذاشته میشد. از دیسک خالی کاغذی که به آن همان غلظت از کورکومین تلقیح شده و از دیسک استاندارد آنتیبیوتیکها به عنوان 2 شاهد آزمایش بهره برده میشد. این plate ها 24 ساعت در دمای 37 درجه انکوبه میشدند و سپس هاله عدم رشد ایجاد شده توسط دیسکها اندازهگیری میگردید. این آزمایشات 3 بار تکرار شد و میانگین قطر هاله گزارش میشد. همچنین با توجه به میزان قطر هاله داشتن فعالیت سینرژیسمی آنتاگونیسمی و یا نداشتن فعالیت هم مشخص میگردید. همچنین در صورت وجود فعالیت سینرژیستی درصد افزایش سطح از طریق فرمول موجود محاسبه و گزارش میگردید. بحث و بررسي يافتهها و نتیجه گیری فعالیت آتنی باکتریال سفکسیم سفوتاکسیم ونکومایسین و تتراسایکلین در حضور کورکومین بر ضدباکتری مورد آزمایش افزایش پیدا کرد. بیشترین درصد افزایش در سطح مربوط به سفکسیم بود با %52/6 میزان این افزایش برای سفوتاکسیم ونکومایسین و تترا سایکلین به ترتیب %24/9 %26/5 %24/4 بوده است. در مورد سایر باکتریها افزایشی در هاله عدم رشد مشاهده نشد. البته باید مورد توجه قرار داد که میزان کورکومین مورد آزمایش 500 میکروگرم در هر دیسک بوده که این مقدار inhibitory-sub به این دلیل انتخاب شده تا نشان دهد میزان افزایش هاله بدلیل اثر سینرژیستی است نه اثر انتی باکتریال خود کورکومین. در حال حاضر دلیل این افزایش اثر انتی باکتریال مشخص نیست. پمپهای transporter efflux از عوامل ایجاد مقاومت میکروبی هستند. ممکن است کورکومین با اثر خود بر این سیستم پمپ باعث این اثرات شده باشد.این اولین تحقیق در سطح جهان راجع به اثر افزایشی کورکومین همراه میکروبها است. امروزه کورکومین بدلیل اثرات متنوع فارماکولوژیک به عنوان یک افزودنی غذایی مهم مورد توجه است. در فاز یک کلینیکال مشخص شده که با مصرف 12 گرم در روز از کورکومین غیر از تهوع و اسهالهای بسیار خفیف عارضه جانبی دیگری ایجاد نمیشود. در نتیجه این ماده میتواند یک انتخاب خوب برای درمان باشد. پیوست همانطور که مشاهده میشود بیشترین اثر سینژیسمی برای آنتي بيوتيكهای سفيكسيم و تتراسيكلين وجود دارد. 10
Staphylococcus aureus Antibiotics (µg/disk) Antibiotic plus Increase in fold area (%) a,b Antibiotic only (A) (B) b کورکومین Cefixime (5) 17 21 52.6 Ciprofloxacin (5) 26 26 0 Amikacin (30) 30 30 0 Vancomycin (30) 17 19 24.9 Ceftazidime (30) 12 12 0 Penicillin G 10 UT 28 28 0 Cefepime (30) 24 24 0 Cephalexin 30 29 29 0 Nitrofurantoin 300 25 25 0 Tobramycin 10 30 30 0 Bacitracin 0.04 0 0 0 Tetracycline (30) 24 27 26.5 Carbenicillin 100 28 28 0 Rifampicin 5 35 35 0 Clindamycin 2 24 24 0 Cefotaxime (30) 26 29 24.4 Erythromycin 5 10 10 0 Gentamicin 10 26 26 0 Streptomycin 10 25 25 0 Kanamycin 30 29 29 0 Ticaracillin 75 22 22 0 Co-trimoxazole 25 30 30 0 Methicillin 5 22 22 0 Nalidixic Acid 30 12 0 Antagonist جدول - 1 هاله عدم رشد محاسبه شده برای آنتی بیوتیکهای مختلف ]منابع[ سال پنجم- شماره ۱5 -تابستان 138۹ 1. Schito GC. The importance of the development of antibiotic resistance in Staphylococcus aureus. Clin Microb Infect. 2006; 12(Supplement 1):3-8 2. Gibbons S. Phytochemicals for Bacterial Resistance. Strengths, Weaknesses and Opportunities. Planta Med. 2008; 74:594-602. 3. Shahverdi AR, Monsef-esfahani HR, Tavassoli F, Zaheri A, Mirjani R. Trans- Cinnamaldehyde from Cinnamomum zeylanicum bark essential oil reduces the clindamycin resistance of Clostridium difficile in vitro, J Food Sci. 2007;72:55-58. 4. Goel A, Kunnumakkara AB, Aggarwal BB. 11
Curcumin as Curecumin : From kitchen to clinic. Biochem Pharmacol. 2008; 75:787 809. 5. Chattopadhyay I, Biswas K, Bandyopadhyay U, Banerjee RK. Turmeric and curcumin Biological actions and medicinal applications. Curr Sci., 2004;87: 44-53. 6. Apisariyakul A, Vanittanakom N, Buddhasukh D. Antifungal activity of turmeric oil extracted from Curcuma longa (Zingiberace). J. Ethnopharmacol. 1995; 49:163-169. 7. Negi PS, Jayaprakasha GK, Jagan MRL, Sakariah KK. Antibacterial activity of turmeric oil : A byproduct from curcumin manufacture. J Agric Food Chem. 1999;47: 8. Rasmussen HB, Christensen SB, Kvist LP, Karazami A. A simple and efficient separation of the curcumins, the antiprotozoal constituents of Curcuma longa Planta Med. 2000; 66:396-398 9. Singh R, Chandra R, Bose M, Luthra PM. Antibacterial activity of Curcuma longa rhizome extract on pathogenic bacteria. Curr Sci. 2002; 83:737-740. 10.Péret-Almeida L, Cherubino APF, Alves RJ, Dufossé L, Glória MBA. Separation and determination of the physicochemical characteristics of curcumin, emethoxy curcumin and bisdemethoxy curcumin. Food Res Int. 2005;38:1039-1044. 4297-4300. 11.Antibacterial Activity of curcuminand Bisdimethyl-curcumin Isolated from Curcuma longa. K.-J. KIM, S.I. JEONG, H.S. SHIN, B.M. LEE, C.H. YANG, S.H. LEE, S.H. HAN, H.H. YU, Y.-O. YOU. Microbiology & Immunology. 12. Antioxidant, antimutagenic and antibacterial activities of curcumin-β-diglucoside. K.S. Parvathy, P.S. Negi, P. Srinivas.Food سال پنجم- شماره ۱5 -تابستان 138۹ 12